氨基柱是同時可以用于正相和反相條件的一種色譜柱。但正相溶劑和反相溶劑是不互溶的,這一點不能忽略。對于新購柱子,首先請注意打開分析測試說明書,了解柱子的保存溶劑。如果保存溶劑與你將要使用的流動相極性不同不會互溶,請先用異丙醇過渡。過渡過程中注意因異丙醇粘度較大,會導致柱壓很高,適當調低流速。如果流動相中還有緩沖鹽類,先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡,避免緩沖鹽的析出。
說起氨基柱,大家熟悉的是拿它來做糖的分析。這是一個典型的HILIC模式。除了HILIC模式以外,氨基柱還可以用做正相和弱陰離子交換兩種模式??梢哉f應用范圍和模式非常廣。
說了這么多我們看看氨基柱該如何使用維護。
新色譜柱如果使用HILIC模式,使用前請使用異丙醇小流速過夜平衡色譜柱。流速建議0.1mL/min,之后再轉換到100%乙腈沖洗20柱體積,然后轉換到和流動相相同比例的不含鹽的乙腈水體系沖洗20柱體積。
1、沖洗
用乙腈:水=60:40條件對色譜柱進行清洗,清洗時,不建議水相比例超過40%,過高使用水相容易導致鍵合相水解。
2、色譜柱再生
當色譜柱經過長時間使用,柱效很低時,可以對色譜柱再生處理,用乙腈:水(水中加入0.05%氨水)=60:40條件沖洗30柱體積。
3、保存
一個月以內的保存,請使用與所選用流動相組成相同的有機溶劑和水的混合溶液(不含酸、無機鹽)進行置換,請避免只用水進行置換;一個月以上的長期保存,在進行了上述處理之后,請用乙腈置換并保存。