氨基柱是同時可以用于正相和反相條件的一種色譜柱。但正相溶劑和反相溶劑是不互溶的,這一點不能忽略。對于新購柱子,首先請注意打開分析測試說明書,了解柱子的保存溶劑。如果保存溶劑與你將要使用的流動相極性不同不會互溶,請先用異丙醇過渡。過渡過程中注意因異丙醇粘度較大,會導致柱壓很高,適當調低流速。如果流動相中還有緩沖鹽類,先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡,避免緩沖鹽的析出。
氨基柱是非常“復雜”和“脆弱”的色譜柱,這就要求我們必須更加細心的去維護。
1、比如每次使用前先接上兩通,確保儀器系統中其他項目殘留的流動相已被置換*;
2、比如在用于反相模式時,在開始使用前先用含有一定比例水相的不含緩沖鹽的流動相過渡,而不要直接上帶有鹽相,特別是較高鹽相的流動相——這是因為一般情況下,色譜柱都保存在純乙腈/純正相溶劑(如是正相溶劑,過渡模式需要更換,這個找機會在講過)中,不過渡的情況下很可能發生鹽析而破壞柱子,導致柱子壽命縮短;
3、比如使用中確保不要配錯流動相,防止溶劑走空等;
4、再比如使用后確保清除*柱子中的緩沖鹽,并保存在純有機相中(ACN)中;
5、后需要提到的一點是,盡管4中要求沖洗*,但是并不是代表可以一直沖洗一直沖洗,壽命跟流經柱子的流動相體積也在一定情況下成反比,我們必須找到一個經綜合考慮后相對較優的中間點,如果無法確認是否沖洗干凈,我們一般認為,10~20個柱體積基本上就能保證沖洗干凈。柱體積怎么算?小編之前的文章中肯定有提到,對于內徑4.6mm的色譜柱,一個柱體積簡易的計算方式是0.1*L(柱長cm)。請記住沖洗的時間,定個鬧鐘,防止沖洗過渡而降低柱子的使用壽命。